紫外分光光度計(jì)已經(jīng)是一種能解決廣泛難題的儀器,從單一波長的測量到高性能多光譜的測量分析。實(shí)驗(yàn)室選擇時(shí)需要根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)室的需要和目的用途來考慮,光學(xué)構(gòu)造和光源、探測方法和數(shù)據(jù)處理等都是要考慮的因素。
光學(xué)構(gòu)造
一般來說,紫外光分光光度計(jì)分為單光束和雙光束兩類。顧名思義,單光束型主要是依賴單束光進(jìn)行測量。一束給定波長的光通過對(duì)照物,然后再通過實(shí)際樣品溶液,就能得到吸光結(jié)果。
雙光束型則是將一束光分成兩束,分別測量對(duì)照樣品和實(shí)際樣品??梢孕』馄坪蜏p少測量時(shí)間。因?yàn)樵黾恿藴y量的速度,所以雙光束分光光度計(jì)在測量一些溶液隨時(shí)間動(dòng)態(tài)變化的研究中大有用處。
光源和檢測方法
分光光度計(jì)的光譜也是需要考慮的一個(gè)重要因素。實(shí)驗(yàn)室研究人員一般希望低價(jià)購入專門儀器定量核酸、蛋白或者細(xì)菌的生長情況。如果需要更大的靈活性,研究者可以考慮一種更高性能的寬光譜儀器,可以程序性地進(jìn)行ELISAs分析和比色分析。
紫外分光光度計(jì)一般覆蓋190nm和380nm波長,通常利用氘燈照明。一些特殊的儀器可以提供滿足光子學(xué)和半導(dǎo)體研究需要的光譜范圍。
一些儀器具有多種光源供選擇:紫外光、可見光和甚至紅外光(780 nm 至3,000 nm)。鎢燈和鹵素?zé)粢话阒桓采w可見光部分(大約380 nm 到800 nm)。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見光區(qū)域。
分光光度計(jì)的帶寬很大程度上依賴于單色儀的狹縫的寬度。可以投射出實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確要求的光譜。一種嚴(yán)格帶寬使得儀器能對(duì)復(fù)雜的混合物進(jìn)行高分辨率的吸光測量。可變的單色儀的狹縫寬度能使一臺(tái)分光光度計(jì)滿足多種實(shí)驗(yàn)需要。
為了測量吸光值,分光光度計(jì)通常使用光電倍增管和光敏二極管。光電倍增管提供快速的反應(yīng)時(shí)間和良好的靈敏度,并且可以在紫外光譜調(diào)節(jié)至特定的范圍。光敏二極管的動(dòng)態(tài)范圍可以在數(shù)秒內(nèi)行使所有的光譜測量。
數(shù)據(jù)管理
大部分單機(jī)型的分光光度計(jì)包含了驅(qū)動(dòng)儀器運(yùn)行和管理數(shù)據(jù)的軟件。高性能的儀器,通常與PC機(jī)一起聯(lián)用,同時(shí)用戶也可以選擇升級(jí)軟件以滿足他們的需要。